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探讨不同固定液对冰冻切片质量的影响
 


更新时间:2010-10-08 14:25:03 作者: 广东医学院附属医院 病理科


 

 探讨不同固定液对冰冻切片质量的影响
林虹 卢荣熙 易施霖 冯晓晓
广东医学院附属医院 病理科,广东 湛江 524001

[关键词] 冰冻切片 ;固定液 ;病理诊断;
 冰冻切片是病理科最常用的快速制片的方法之一,是一种在低温条件下使组织冷冻到一定的硬度,然后进行制片。因其制作过程较石蜡切片相对简便、快捷,故常应用于手术中快速病理诊断。但由于切片制作过程中,有许多因素影响制片的质量,并进一步影响病理诊断。因此,制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。这就需要从病理标本取材、切片、染色等每一步骤都精益求精。而固定是冰冻切片首要而且关键的步骤,本文通过不同固定液对冰冻切片质量的比较,探讨不同固定液对冰冻切片质量的影响
1. 临床资料:
1.1 材料标本 选择30例我院临床手术切除的新鲜标本,主要有乳腺,甲状腺等器官组织。
1.2 固定剂
A.95% 乙醇;B. 丙酮; C.甲醇; D.10%中性福尔马林液E,100% 乙醇
1.3 方法 取厚度2-3cm的新鲜乳腺,甲状腺等器官组织。放进恒温莱卡冰冻切片机(温度-18°— -20°),1-2mim后,每例切片各5张,厚度4-5微米,切片后立即放进不同的固定液固定0.5-1min,
1.4 H,E 染色 将固定过的切片用蒸馏水洗,放进改良的GILL苏木素(预先放在65°恒温水域箱加热)2-3mim,自来水洗,盐酸分化液分化10S,温水反蓝30S,伊红染色30S,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
2. 结果
根据镜下细胞收缩的程度,进行各种固定液的比较,结果如下:
固定液 细胞收缩程度 细胞结构
95% 乙醇 +++ 细胞收缩、核着色尚清,核浆对比度一般,细胞结构模糊,
丙酮 ++++ 细胞严重收缩、核着色尚清,核浆对比度一般,细胞结构模糊
甲醇 +—++ 细胞基本正常、核着色清楚,核浆对比度好,细胞结构清晰。
10%福尔马林液 — 细胞肿胀、核着色差,核浆对比差,细胞结构模糊,
100% 乙醇 ++---+++ 细胞基本正常、核着色清楚,核浆对比度尚好,细胞结构尚清晰。
3讨论:
冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断,协助临床医生确定病变的范围,决定手术的范围,所以制作一张高质量的冰冻切片非常重要,但制作一张高质量的冰冻切片与石蜡切片相比仍有一定的差别【1】。大多数病理诊断医生看冰冻切片时感觉镜下的组织细胞比常规石蜡切片组织大,也就是显微镜下组织细胞形体差别,这主要是由于冰冻切片是由快速切片,快速固定,快速染色这三个方面相互影响所造成的,其中由于组织固定液因素影响组织细胞形态的改变,对病理医生的诊断影响最大,远比由于技术员操作因素所致的冰晶引起的组织细胞形态改变更难把握,通过研究我们发现虽然甲醛对组织的穿透力强,无明显的收缩和膨胀作用,但不能抵消因冰冻引起的细胞内液的膨胀【2】,故有核肿胀、模糊;95%乙醇、丙酮细胞收缩明显,细胞核保存不够清晰,无水乙醇能固定脱水,但收缩硬化作用明显,核着色没有甲醇佳,而甲醇既有乙醇的收缩固定作用,但收缩性比乙醇小,恰能抵消因冰冻引起的细胞内液的膨胀,故能较好的保存细胞的正常结构,镜下组织结构清晰,核着色好,且冰晶出现率低,故甲醇作为常用冰冻切片固定液的效果比其他4中固定液的效果好,是一种值得推荐的理想冰冻固定液。
参考文献:
【1】 朱慧君,杨其昌。手术中快速冰冻切片及相关问题。江苏医药,2005,31(12):953),
【2】 孙和国,何毅敏等。三种固定液对冰冻组织切片固定效果的比较[j]诊断病理学杂志。2001,8(2):114
 

 

 

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