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肾穿标本的制作特点


更新时间:2006-04-22 08:38:43 作者: 中山大学附一院病理科: 赖英荣

 

肾穿活检的标本主要来源肾移植、肾病两种,而这两种情况活检标本都相对较小,而要做的检查相对较多,因而需将标本分成三份,(1)常HE及特殊染色(2)冰冻切片(3)电镜检查等,因此,肾穿样本的取材和制作直接影响最后病理诊断。下面对肾穿标本取材及制作的关键问题作分析和讨论。

一  材料和方法

1 ,中山大学附属医院及省内各大医院送来的肾新鲜, 标本5千多例,将新鲜的肾穿标本在放大镜下观察,确定是否有肾小球,然后将有肾小球的标本分成三份,一份作冰冻切片(最好有肾小球1—4个),二份作电镜检查(1—2个肾小球)2%戊二醛固定,余下作常规HE及特殊染色。

2 , 冰冻切片一般切片7—8张,厚度为4—5微米,作IgG、IgA、IgM、C3、G1q、Fg抗体检查,石蜡包埋切片2—3微米,分别作常规HE染色,PAS  , Masson ,  PASm以及刚果特殊染染色。

3 ,  Gomori六胺银染色法溶液配制

六胺银贮备液,5%硝酸银水溶液5ml+3%六次甲基四胺100ml,配好4℃冰箱备用,

5%四硼酸钠水溶液,

六胺银工作液, 六胺银贮备液10 ml+双蒸水20%+5%四硼酸钠水溶液2 ml.

PASm染色步骤:

(1)切片脱蜡至水

(2)0.5%高碘酸氧化30分钟,水洗,

(3)10%铬酸氧化20分钟,水洗,或用2%硫酸铁铵水溶液5分钟,%偏重亚硫酸钠处理30 s,水洗,蒸馏水洗

(4)放入六胺银工作液20-30分钟65度水溶箱中,取出切片, 蒸馏水洗,镜检以肾小球毛细血管基底膜出现黑色的沉淀为标准,

(5)0.1%氯化金水溶液调色30 s.

(6)流水冲洗10分钟

(7)Maery苏染3分钟

(8)流水冲洗5分钟

(9)0.5%伊红染3分钟

(10)常规脱水透明封片

HE   PAS   Masson  淀粉染色方法与步骤略

二  结果

2.1  96%左右的肾穿标本都能确保冰冻、HE、电镜标本都有肾小球。

2.2  PASM: 肾小球囊基底膜和肾毛细血管球基底膜,弹力纤维及一些网状纤维是黑色,细胞核蓝褐色,细胞浆浅红色。

2.3  Masson:肾小球毛细血管基底膜,肾小管基底膜,间质纤维蓝色,肾小球内免疫复合物染成红色。

2.4  PAS:肾小球毛细血管基底膜,肾小管基底膜,一些较明显的免疫复合物染成红色。

三   讨论

标本取材最好在B超穿出后立即进行分取,因为标本越新鲜,在放大镜下观察肾小球越明显,肾小球在组织内见小红点,冰冻标本要用OCT包埋后放入冷冻箱内,如液痰瓶或低
温冰冻机内。常规标本及电镜标本要立即固定,因为标本离体后即使放入冰壶,但因组织小,很快干固,而放入湿纱布后,由于组织吸水而变白,在分标本时肾小球观看有困难而影响取材。在作特殊染色时基底膜溶解而变粗及模糊不清。HE染色观察到有自溶解现象。

PASM染色时,如果用铬酸氧化时,基底膜相对清晰,但浸银时间稍长,二用2%硫酸铁铵水溶液代替铬酸,浸银时间短,但基底膜着色深,粗大。同时加染HE 染色,便于医生在一张片观看银着色及HE的情况。

冰冻切片余下的标本要放回常规固定标本内,同时做常规切片染色。以确保常规HE 切片有肾小球。

 

 

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