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病理HE制片技术的规范和质量控制


更新时间:2006-04-22 08:38:43 作者中山大学中山医学院病理学教研室 梁英杰


(二)

4.2  组织脱水   组织脱水就是利用某些能与水相混合的化学试剂泡浸组织,把组织内水分逐步置换出来。

脱水的目的:组织经过水溶性固定液固定和水洗后,其间隙内含有较多水分,因水与二甲苯、石蜡是不能混合的,即使组织间隙内含有极少的水也会阻碍二甲苯和石蜡的渗透,所以未经脱水或脱水不彻底的组织不能直接进入二甲苯透明和石蜡中浸蜡。只有使组织内部水分彻底脱除,才能进行透明、浸蜡、包埋组织蜡块才能长久保存。

常用的脱水液为乙醇,用乙醇脱水要由低浓度逐级上行至高浓度(一般70~100%的浓度),逐步置换组织内的水份,最后组织内部水分被高浓度乙醇所取代。组织在乙醇脱水时,低浓度乙醇(95%以下)的时间可适当延长,高浓度乙醇(100%)脱水时间不能过长。

4.3  组织透明   组织脱水后,要经过一个浸蜡前的中间溶剂透明过程;才能进行浸蜡。

透明的目的:组织经脱水后、浸蜡前必须经过某些既能与脱水剂相混合又能溶解石蜡的中间溶剂处理。组织在中间溶剂时,组织间隙内存留的脱水剂完全为中间溶剂所取代时,组织就呈现透明状态,此时即可进行浸蜡。透明液多采用二甲苯,组织经无水乙醇脱水后转入二甲苯透明,组织的大小、厚薄不同,透明时间也不同,一般为30~60分钟。

4.4  组织浸蜡   用于浸蜡的石蜡最好是熔点稍低(56~58℃),低温浸蜡对保存组织细胞内的抗原免疫活性,避免组织收缩和变硬变脆有帮助。根据脱水机配有的蜡缸数量,浸蜡采用二级至四级,以尽量清除二甲苯。不同大小和厚薄的组织浸蜡时间有所不同,一般为1~3小时。浸蜡温度过高,浸蜡时间过长均可导致组织收缩,变硬变脆,难以切出理想切片。

4.5  组织包埋   组织经浸蜡后即可进行包埋。包埋时,包埋石蜡的温度要比组织高(约3~5℃),否则包埋冷凝后组织与包埋石蜡分离,特别是在冷天包埋时,动作更要迅速,否则容易导致组织与石蜡融合不好,影响切片。包埋时把组织最大最平切面或所需的病灶切面向下,对皮肤、肠管和囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。组织包埋完后,蜡块要与取材时记录的组织形状和数量核对,发现问题,及时解决。

4.6  组织切片   组织切片厚薄要适宜,薄的切片细胞不会重叠,易于观察。切片的厚度应为3~4μ,对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体,切片的厚度应为2~3μ。要切出薄而平整的切片需要正确使用切片机,切片前要把切片机上有关的各螺旋拧紧,如没有拧紧切片机上有关的各螺旋,保证切片刀锋利和调至合适的角度。组织蜡块过硬,切片刀或蜡块没固定好,会出现跳刀、切片成一截厚一截薄的现象。

4.7  贴片烤片   切出的蜡片可先放在约10~15%乙醇内,然后置恒温水中,这样因水的表面张力比乙醇大,蜡片便容易在温水中展平,根据包埋石蜡的熔点不同,水温约为39~42℃左右。贴片时要注意贴在载玻片中间稍偏右的位置上。对一些组织如皮肤、胃肠等贴片时要注意表皮或粘膜面在下,真皮或肌层在上,方便在镜下观察。贴好片后放入约60~65℃的烤箱内或恒温热板上烤烘15~30分钟,使蜡片牢固地粘附在玻片上。烤烘切片的温度一般比包埋石蜡的熔点高5℃左右。

4.8  切片脱蜡   切片在染色前必须脱蜡干净,脱蜡不干净会影响组织细胞的着染,即使着染,组织和细胞也会模糊不清。脱蜡一般用两级或三级脱蜡剂如二甲苯,时间为10~20分钟。如果脱蜡剂使用多次或室温较低,均需延长脱蜡时间。


(-待 续-)

 

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