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骨髓穿刺活检制片质量的探讨


作者:广东省人民医院病理科   蔡秀玲 骆新兰 张威 朱小兰 姚军    更新时间:2006-04-22 08:38:40  

 

内容:骨髓活检切片及染色技术的探讨

造血系统疾病的诊断除了依靠细胞形态的检查外,在很大程度上还得依靠组织学的检查。骨髓穿刺活检的病理诊断,是临床用药的指南。因此,骨髓石蜡切片的质量控制显得相当重要。下面分别从固定、脱钙、切片、烤片、染色等程序,谈谈我们的做法和体会。  

    一、 固定

目的:  (1) 防止自溶;(2) 凝固细胞内的蛋白质、糖、脂肪等;(3) 产生不同的折射率;

          (4) 硬化组织;(5) 对染料产生不同的亲和力;(6) 保存抗原成份

时间:18~24小时

要求:组织离体后立即固定

固定不及时可引起蛋白质的降解,引起染色不可逆的减弱或者消失,甚至与非特异无关的分子结合.

任何组织离体后由于缺血缺氧而发生变性,甚至自溶,腐败。因此,穿刺的骨髓组织必须立即固定。常用的固定液是10%缓冲中性甲醛。但由于临床上多数用10%甲醛,标本送到病理科后马上换成中性甲醛。固定时间可达18--24小时,至少不少于12小时,但固定时间也不能过长.固定时间不足易造成细胞有关成份弥散,时间过长也可导致抗原成分的破坏,免疫组化常以失败告终。

二、 脱钙及其处理

骨髓组织是富含钙盐的组织,必须经过脱钙才能制片.

脱钙目的:去除组织中的无机钙盐.

目前常用的脱钙制是酸类脱钙剂,既有单纯的酸类脱钙剂,也有混合的酸类脱钙剂。不论使用哪类脱钙剂,脱钙之前,组织必须充分固定(至少3-4小时),否则易造成组织结构的破坏。最常用的混合酸类脱钙剂是4%盐酸甲醛脱钙固定液:

     37~40%甲醛      10ml
         盐酸              4ml
         蒸馏水           86ml
脱钙时间:2~4小时(具体视组织含钙量而定)

脱钙“终点”的判断:

手捏富有弹性,无硬的感觉;

用取材刀的刀锋轻刮骨髓表面,无明显的沙沙声;

§    用大头针轻刺骨髓能顺利通过;

§    化学方法:脱钙液5ml+浓氨水1ml+0.5%草酸0.5ml,然后观察有无沉淀,若无沉淀表明脱钙已达终点。

§    脱钙完毕后,酒精处理:70%酒精泡2—3小时,期间更换2次酒精。

§    目的:防止组织膨胀,增强染色。

严禁在脱钙液中过夜,否则,将给染色带来影响。如脱钙时间过长,可先用70%乙醇处理,然后再用1%碳酸锂处理,以助着色。

   三、 切片、

 要求和标准:(1)切片平整、结构完整;

            (2)无皱折、无刀痕;

            (3)细胞尽量单层分布,一般情况下

                 切片厚2um(尤其是急性髓细胞白

                 血病及淋巴瘤累及骨髓的病例)。

切片的技巧:(1)对角包埋;

            (2)刀口锋利;

            (3)切片时组织块要够冷

由于血液病患者的特殊性(发热、贫血、出血感染等)及骨髓组织自身的特殊性--组织硬而脆。掌握切片的技巧尤其重要。目前,多数医院的病理科已使用一次性刀片。一次性刀片有其独特的优点,但其韧性和硬度远不如钢刀,一个刀口切上十来个蜡块后,刀锋变钝,蜡片皱缩,若这种情况下切骨髓组织,将出现组织挤压现象。为了确保切片质量,切骨髓组织时最好选用新的刀口,切片既完整又薄,切片厚度约为2um较为合适。若切片过厚,细胞重叠,必将影响医生的诊断。

四、 捞片

捞片看似简单,但要捞好每一张片,却要有一定的技巧。当每一张切片摊片时,既要让它充分的舒展(以防皱折),又不能让组织散开(细胞极易弥散),就得靠我们的观察及及时捞贴。另外,对捞片水温的掌握也很重要。骨髓组织合适的捞片水温应为47-480C。骨髓组织因纤维支架少(尤其是增生极度活跃的骨髓组织),水温过低,切片难以展开;水温过高,组织容易散开,其原有的组织结构遭到人为的破坏,对需要计算细胞数目的特殊病变(如再障时计标巨核细胞的数目),此项工作难以进行。

五、烤片

烤片尽量采用恒温烤箱烤片,温度为60—620C,烤片时间1—2小时。避免用摊片仪烤片及电吹风吹片。前者易致骨髓组织散开而破坏其结构,后者不易掌握温度,易造成组织烤焦。

六、HE染色的控制

 采用标准化的染色程序(自动染色机染色)而且单列骨髓染色程序.染色时间:Mayer苏木素   25min  伊红    1min, 人工染色时分化不要过头,每天检查染色质量,以保证切片的完整,无刀痕、振刀;染色鲜艳—核浆对比分明,细胞无固缩、挤压等现象。

另外,为了尽早发出病理报告,网状纤维染色和含铁血黄素染色已作为我科骨髓切片的常规染色,前者用于判断骨髓纤维化程度,后者则反映细胞和间质中铁颗粒情况,对诊断缺铁性贫血帮助很大。做好这两种特殊染色,对诊断有很大的帮助。

总之,做好一张完美的骨髓切片,是靠方方面面技术的,只要我们做好每个环节的工作,就可做出一张满意的切片!

 

 

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