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骨髓穿刺组织制片方法改进的探讨


作者:中山大学基础医学院病理教研室    董  愉   梁英杰  吴惠茜  刘泳东    更新时间:2006-04-22 08:38:48  

 

由于骨髓组织含有大量丰富的钙盐而非常坚硬,不能直接制片。要想获得一张优质的骨髓切片,必须经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色。但脱钙过度或不当均可影响上述染色。因此,脱钙时间和脱钙液的选择十分重要。

传统的方法用14%硝酸脱钙液常出现脱钙过度或不足,造成组织切片不完整、组织结构破坏、细胞模糊不清,以致医生阅片时诊断困难甚至误诊。为此,近一年来,我们改用4%盐酸脱钙液,代替原有的14%硝酸脱钙液,进行骨髓组织脱钙,取得到了比较好的效果。现将方法介绍如下:

1. 材料与方法

1.1材料:中山一院2004年全年骨髓活检标本85例。

1.2方法:

第一天:新鲜的骨髓标本签收后立即置于10%甲醛液固定(过夜)。

第二天:早上8:00上班,立即置于4%盐酸脱钙(3.5——4小时);稍水洗。

11:30置于70%酒精30分钟;

12:00流水冲洗2.5小时,然后转入10%甲醛液补充固定。

下午5:30分将骨髓标本与当天标本一起放入全封闭自动脱水机中脱水。

第三天:石蜡包埋、切片、染色、出片交医生发报告。

2. 结果

与以往用14%硝酸脱钙相比,骨髓切片完整,细胞形态保存良好,染色鲜艳,核质对比清晰,并且免疫组化染色得到的效果较好。

3. 讨论

实践证明,过去我们用的14%硝酸对骨髓组织脱钙,具有作用快,脱钙能力强的特点,但由于硝酸是强酸,往往对骨髓组织脱钙时间不易控制(我们以大头针能刺入骨髓组织无阻力感为标准来衡量脱钙时间),常出现脱钙不足或脱钙过度等状况。脱钙时间过长,骨髓组织破坏,结构模糊不清或者无法制片;脱钙时间过短,骨髓组织较硬,以致无法制造出完整的切片。

穿刺质量较好的骨髓,在固定充分的情况下14%硝酸与4%盐酸的比较,见下表:

14%硝酸 4%盐酸
判断脱钙“终点” 用大头针刺入骨髓组织无阻力感 用大头针刺入骨髓组织无阻力感
优点 强酸,脱钙迅速 逐渐渗入,对骨髓组织破坏较小
缺点 对脱钙时间难以控制,容易出现反弹,有时难以制片 脱钙时间较长
染色结果  核质对比度较差,骨髓组织结构模糊不清 骨髓组织结构完整,染色鲜艳,核质对比分明
免疫组化   效果较差 较稳定,阳性率高

医院早上送来的骨髓组织,往往是刚刚穿刺的新鲜标本,固定时间还不够。需要进一步固定过夜,这样做与当天穿刺当天取材制片的标本比较,切片完整,厚薄均匀,细胞结构保存良好,免疫组化、特染染色效果较好。相反,固定时间不够的骨髓组织,无论在切片、HE染色、特殊染色和免疫组化中,染色效果都不理想。以致病理医生难以作出诊断,拖延了病理报告发出的时间,甚至造成误诊。

由于骨髓组织富含钙盐、纤维支架少,组织具有硬、脆、疏松的特点,4%盐酸脱钙液酸度比硝脱钙液酸度较低,因此我们采取延长脱钙时间的做法,使脱钙过程缓慢而较持久地进行(脱钙时间一定不能少于4小时,以大头针能穿过为准),骨髓组织脱钙才算完成。流水冲洗一定要充分,如果冲洗时间不够,骨髓组织带有酸性,HE染色时胞核着色偏浅,核质对比不清晰,免疫组化假阳性率高。影响病理诊断。因此流水冲洗时间不能少于2个半小时。由于盐酸会使组织膨胀,而酒精对组织具有收缩作用,因此,脱钙后将组织放入70%酒精作用30分钟,以减低盐酸对组织膨胀的影响。

经过一段时间的反复比较和实践,用4%盐酸这种脱钙方法能使骨髓组织切片、HE染色、特殊染色和免疫组化达到稳定的效果,有助于诊断,得到广大病理医生的认同。值得大力推广。

 

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