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免疫组织化学二步法在骨髓穿刺组织中的应用体会


作者:广州市儿童医院病理科  曾荣新 夏健清 郑秀霞    更新时间:2006-04-22 08:38:28  

 

骨髓穿刺组织所进行的病理检查中经常出现各种类型的肿瘤方面的疾病,这些肿瘤的分类常需进行免疫组化加以区分。在日常进行免疫组化染色过程中,我们对其操作程序进行了一定的探索及改进,现介绍如下:

一.材料与方法

 材料 骨髓组织均为我院临床科室穿刺所得,穿刺后立即置于10%中性福尔马林液后送我科。待其固定好后经Thoma脱钙液(Thoma液配方:硝酸10ml,95%乙醇50ml,甲醛5ml。)浸泡一小时,流水冲洗30分钟,常规脱水,包埋,切片。

方法  1. 切片常规脱蜡至蒸馏水。

2. 80℃以上PBS或柠檬酸抗原修复液中浸泡10分钟,自然冷却至室温(需抗原修复处理的除外)。

3.PBS浸洗三次,每次各三分钟。

4.滴加一抗,室温一小时或4℃冰箱过夜。

5.PBS浸洗三次,每次各三分钟。

6.滴加二步法试剂A(福州迈新公司产品),室温10分钟。

7.PBS浸洗三次,每次各三分钟。

8.滴加二步法试剂B(福州迈新公司产品),室温15分钟。

9.PBS浸洗三次,每次各三分钟。

10.DAB显色。

11.苏木素浅染约一分钟,1%盐酸酒精分化,水洗返蓝。

12.酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

二.结果   阳性细胞棕黄色,胞核浅蓝色,背景清晰。

三.讨论

1.对于骨髓组织制片,脱钙很关键。我们试验过经Bouin液固定后再用Thoma脱钙15分钟,其效果与用10%中性福尔马林液固定后再用Thoma液脱钙1小时差别不大。

2.由于有时脱蜡不够彻底,易致背景黄染而不清晰。对于检测不需抗原修复的抗原的组织,我们在常规脱蜡至蒸馏水后,经80℃以上PBS或柠檬酸抗原修复液中浸泡处理10分钟,待其自然冷却至室温,再经PBS洗三次,则能解决因脱蜡不彻底而致的这一影响因素。

3.由于时间的关系或工作的需要,在滴加一抗后至DAB显色前的PBS浸洗中,我们经常在其中浸洗1~2小时甚至更长时间后,再接着进行下一步操作程序,亦不影响结果的准确性。从而可以做到机动灵活。

4.骨髓组织抗原检测中很多种类需经高温抗原修复,这又极易导致组织细胞内源性生物素的着色而而致假阳性。为解决这一问题,我们选用二步法ElivisionTM试剂盒。

二步法ElivisionTM试剂盒中介绍的A液室温孵育15分钟,B液孵育30分钟,经多次实验,我们发现其孵育时间还是偏长,极易导致背景深染。当室温高于25℃时,A液孵育10分钟,B液孵育15分钟已能达到好的效果

 

 

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